《现代医学》2022年1月

　　卵巢子宫内膜异位囊肿组织中Bax、Bcl-2蛋白表达与超声引导下聚桂醇介入术后复发的关系分析

　　张云华,范志青

　　摘要:

　　目的:观察卵巢子宫内膜异位囊肿组织中B淋巴细胞瘤-2相关X(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达,并分析其与超声引导下聚桂醇介入术后复发的关系。

　　方法:回顾性分析221例卵巢子宫内膜异位囊肿实施超声引导下聚桂醇介入术治疗的患者的资料,术中均取囊肿组织,记为研究组;另回顾性分析206例良性病变患者的资料,均经活检穿刺术取卵巢子宫内膜组织并有石蜡存档标本,记为对照组。采用免疫组化法检测2组组织中Bax、Bcl-2蛋白表达;对研究组随访3年,对比复发和未复发患者囊肿组织Bax、Bcl-2蛋白阳性表达率;采用Logistic多元回归分析探讨Bax、Bcl-2蛋白表达与研究组复发的关系。

　　结果:研究组增生期、分泌期Bax蛋白阳性表达率及总阳性表达率均低于对照组,Bcl-2蛋白阳性表达率均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);研究组复发率为22.17%,复发患者囊壁厚度≥0.3 cm,入院时血清CA125阳性,Bax蛋白阴性表达率、Bcl-2蛋白阳性表达率均高于未复发患者,差异均有统计学意义(P<0.05),且Logistic多元回归分析证实以上变量均为研究组复发的独立危险因素。

　　结论:在卵巢子宫内膜异位囊肿组织中Bax蛋白阳性表达率低,Bcl-2蛋白阳性表达率高,且Bax蛋白阴性表达、Bcl-2蛋白阳性表达与囊壁厚度≥0.3 cm和入院时血清CA125阳性等均可增加超声引导下聚桂醇介入术后复发的风险。

　　关键词:

　　B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白;B淋巴细胞瘤-2蛋白;卵巢子宫内膜异位囊肿;超声引导下聚桂醇介入术;复发

　　子宫内膜异位症是指具有生长活性的子宫内膜在子宫腔外种植并生长的一种常见妇科病,常与周围组织产生严重粘连,可侵袭或破坏脏器,多伴有痛经、不孕等表现。卵巢子宫内膜异位囊肿是指由于卵巢子宫内膜异位产生的囊肿,囊肿可随着病情发展不断增大,给患者造成痛苦[1]。调查显示[2-3],子宫内膜异位症的发病率为6%～10%,在妇科疾病就诊患者中占30%～40%,其中约有30%的患者伴卵巢子宫内膜异位囊肿,可极大增加患者不孕症的风险。超声引导下聚桂醇介入术是卵巢子宫内膜异位囊肿患者常用的微创疗法,可精准定位、抽出囊液并利用聚桂醇促使囊肿萎缩,但是术后仍有复发风险[4-6],且影响因素较多。B淋巴细胞瘤-2相关X(Bax)蛋白、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白均是目前常见的凋亡调节因子,在子宫内膜异位症组织中Bax表达偏低,Bcl-2表达偏高[7-8]。但在卵巢子宫内膜异位囊肿组织中二者的表达及其与复发是否有关尚需进一步探讨。故此,本研究特回顾性分析221例卵巢子宫内膜异位囊肿实施超声引导下聚桂醇介入术治疗的患者和206例良性病变患者的资料探讨上述问题,旨在为预防此类患者复发预防提供新思路。

　　一、 资料与方法

　　1.1  一般资料

　　回顾性分析本院2016年1月—2017年6月收治的221例卵巢子宫内膜异位囊肿实施超声引导下聚桂醇介入术治疗的患者资料,术中取囊肿组织,记为研究组;另回顾性分析同时期医院收治的206例良性病变患者资料,均经活检穿刺术取卵巢子宫内膜组织并有石蜡存档标本,记为对照组。研究组年龄28～58岁,平均(39.41±6.89)岁,已婚200例、未婚21例,已育129例、未育92例;子宫内膜分期:增生期115例、分泌期106例,囊肿直径2.0～10.0 cm,平均(5.45±1.01)cm。对照组均为子宫肌瘤,年龄26～53岁,平均(34.75±6.58)岁,已婚192例、未婚14例,已育120例、未育86例;活检穿刺术时子宫内膜分期:增生期108例、分泌期98例。2组年龄、婚史、生育史和子宫内膜分期差异均无统计学意义(P>0.05)。

　　纳入标准:(1)研究组均确诊为子宫内膜异位囊肿且均实施超声引导下聚桂醇介入术治疗,且术中均取囊肿组织;(2)对照组均为同时间段收治的子宫肌瘤患者,且经活检穿刺术取卵巢子宫内膜组织并有石蜡存档标本;(3)研究组均随访3年,且明确术后复发情况;(4)2组均有完整的资料。

　　排除标准:(1)伴有其他类型妇科疾病者,如宫颈炎、盆腔炎、宫颈癌等;(2)近6个月内有激素治疗史者;(3)黄体血肿或其他卵巢子宫囊腺瘤者;(4)有脏器功能障碍者;(5)卵巢子宫内膜异位囊肿直径<2.0 cm或>10.0 cm者;(6)失访或随访期间意外死亡者;(7)随访期间切除卵巢或子宫者。

　　1.2  方法

　　采用免疫组化法检测2组组织Bax、Bcl-2蛋白表达。参照免疫组化检测试剂盒(购自深圳晶美生物科技有限公司)说明书操作,首先石蜡包埋、修整组织块,4μm层厚连续切片,脱蜡后水化,并于压力锅中进行抗原热修复。染色前标注,滴加一抗(鼠抗人Bax、Bcl-2单克隆抗体,购自美国Abcam公司,放大倍数1 000),4℃过夜;滴加二抗(兔抗鼠Bax、Bcl-2多克隆抗体,购自美国Abcam公司,放大倍数5 000),室温2 h。滴加显色液,5～10 min后滴加蒸馏水,将切片以自来水冲洗干净并以蒸馏水冲洗,苏木素复染、盐酸酒精分化、磷酸盐缓冲液返蓝,梯度浓度酒精脱水、吹干,中性树胶封片。在光学显微镜下观察染色情况,Bax定位于细胞膜和细胞浆,Bcl-2定位于内质网和核膜,均以黄色或褐色染色为阳性表达。判断标准:将无色、淡黄色、棕黄色和棕褐色染色者分别记为0、1、2、3分;将阳性细胞占比0%、≤10%、>10%且≤50%、>50%且≤75%、>75%者分别记为0、1、2、3、4分,二者相乘,结果>3则记为蛋白阳性表达[9]。

　　卵巢子宫内膜异位囊肿复发的判断方法:术后定期复诊,将治愈后再次出现相关症状和体征,附件区可扪及囊肿并与子宫粘连,超声等辅助检查证实再次出现卵巢子宫内膜异位囊肿者记为复发。

　　Bax、Bcl-2蛋白表达与研究组复发的关系分析:收集可能影响研究组复发的相关因素资料,包括年龄、婚史、生育史、子宫内膜分期、囊肿直径、囊壁厚度、入院时血清CA125(正常参考范围:<35 U·ml-1)、囊肿位置和促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-α)应用,同Bax、Bcl-2蛋白表达一并作为自变量,研究组将是否复发作为因变量,分析自变量与因变量的关系,变量赋值结果见表1。

　　1.3  观察指标

　　对比2组组织Bax、Bcl-2蛋白阳性表达率;

　　统计研究组复发情况;分析Bax、Bcl-2蛋白表达与研究组复发的关系。

　　1.4  统计学处理

　　对比2组组织Bax、Bcl-2蛋白阳性表达率;统计研究组复发情况;分析Bax、Bcl-2蛋白表达与研究组复发的关系。

　　二、 结果

　　2.1  两组组织Bax、Bcl-2蛋白阳性表达率对比

　　研究组增生期、分泌期Bax蛋白阳性表达率及总阳性表达率均低于对照组,Bcl-2蛋白阳性表达率均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05),见表2。

　　2.2  研究组复发率情况统计

　　研究组术后随访3年内共有49例复发,复发率为22.17%(49/221)。

　　2.3  囊肿组织Bax、Bcl-2蛋白表达与研究组复发的关系分析

　　研究组复发和未复发患者中年龄、婚史、生育史、子宫内膜分期、囊肿直径、囊肿位置和GnRH-α应用占比差异均无统计学意义(P>0.05),复发患者囊壁厚度≥0.3 cm、入院时血清CA125阳性、Bax蛋白阴性表达和Bcl-2蛋白阳性表达占比均高于未复发患者,差异均有统计学意义(P<0.05),见表3。

　　经Logistic多元回归分析可知,囊壁厚度≥0.3 cm、入院时血清CA125阳性、Bax蛋白阴性表达和Bcl-2蛋白阳性表达均是研究组复发的危险因素,见表4。

　　三、 讨论

　　卵巢子宫内膜异位囊肿常见的病因有子宫内膜种植、直接蔓延、组织生化刺激和静脉或淋巴管迁移等,最初多以子宫内膜异位为主要表现,但随着病情不断加重可伴有囊肿,导致组织粘连,甚至可影响排卵,危及患者的生殖能力与心理健康。卵巢子宫内膜异位囊肿术后易复发,可能由于病因未彻底解除所致,且此类患者术后复发的危险因素较多[10-12]。本研究中,研究组复发率为22.17%,低于洪艺煌[13]报道的28.75%,高于龚曌等[14]报道的16.78%,可能是所选病例的病情不同、治疗措施不同、术后支持治疗措施差异和术后随访时间不同等所致。但本研究与上述报道均证实卵巢子宫内膜异位囊肿术后有复发风险,对其危险因素进行系统化的分析探讨并积极寻找新的影响因素以加强对复发的防控具有十分重要的意义。

　　卵巢子宫内膜异位囊肿是子宫内膜组织异常增生的结果,而组织异常增生与细胞的增殖与凋亡失衡有紧密关系。本研究中,研究组增生期、分泌期囊肿组织Bax蛋白阳性表达率及总阳性表达率均低于对照组,Bcl-2蛋白阳性表达率均高于对照组,表明在卵巢子宫内膜异位囊肿组织中Bax蛋白表达偏低,Bcl-2蛋白表达偏高。Bax是最早发现的促凋亡因子,其结构中有21%的氮基酸与Bcl-2同源,在其分子结构中含有类似于抗凋亡成员的疏水C端,该蛋白高表达有利于促进细胞凋亡,被称为凋亡促进因子[15]。有研究指出[16],Bax可加速细胞凋亡,在多种恶性肿瘤组织中表达下降,抑制恶性肿瘤细胞凋亡。而卵巢子宫内膜异位囊肿虽然属于良性病变,但亦是组织异常增生的结果,因此此类组织中Bax蛋白表达下降,且意味着囊肿组织细胞凋亡减少,术后囊肿复发的潜能高,故而Bax蛋白阴性表达是卵巢子宫内膜异位囊肿术后复发的危险因素。Bcl-2可保护各种细胞使其免遭凋亡,被认为是重要的凋亡抑制因子。Bcl-2主要是通过抑制氧自由基产生或发挥抗氧化剂作用抑制细胞凋亡的,其C末端含有疏水跨膜区,负责定位和插入到线粒体外膜,抑制细胞凋亡。有研究[17]指出,Bcl-2表达可对抗细胞内外的氧自由基产生的毒性,不仅有助于抑制细胞凋亡,还可延长细胞寿命。目前已有多项研究证实Bcl-2蛋白阳性表达是多种病理性凋亡的关键参与因子[18-20]。本研究还证实复发患者囊肿组织Bcl-2蛋白阳性表达高于未复发患者,且Bcl-2蛋白阳性表达是研究组复发的危险因素,与上述报道和分析相符。由此可知Bax蛋白阴性表达、Bcl-2蛋白阳性表达均有助于抑制细胞凋亡,参与卵巢子宫内膜异位囊肿的发病和超声介入术后复发的病理改变过程。

　　此外,本研究还发现囊壁厚度≥0.3 cm、入院时血清CA125阳性均是研究组复发的独立危险因素。囊壁厚度≥0.3 cm的患者超声介入术操作难度大,术中无水乙醇吸收少,因此部分患者的效果不甚理想,术后易复发;入院时血清CA125阳性表明患者有一定的恶性潜能,因而术后易复发。既往研究[21]显示,术后用药也是卵巢子宫内膜异位囊肿患者术后复发的危险因素,本研究与上述报道不符,可能原因为:本研究所选患者术后均要求应用GnRH-α治疗,但有极个别患者治疗依从性不佳,但由于病例数少,可能会导致结果出现偏倚。

　　综上所述,卵巢子宫内膜异位囊肿组织Bax蛋白表达偏低,Bcl-2蛋白表达偏高,且患者超声引导下聚桂醇介入术后有复发风险,囊壁厚度≥0.3 cm、入院时血清CA125阳性、Bax蛋白阴性表达和Bcl-2蛋白阳性表达均是此类患者术后复发的独立危险因素,应加强防控。